缓冲记 今

ips制备：（1）HYF（4月强直发作，癫痫，5岁偏头痛，右侧为主，无PKD发作、HFF，父，对照、HY，母，携带，PKD。（2）LBL，CADASIL；（3）XJ，线粒体相关基因

病毒表达时间约1个月，但10天左右也会有表达；
小鼠发作后，保持状态稳定，半小时后取材检测fos RNA或者1-1.5小时后取材检测fos蛋白；
typan blue终浓度0.05%（母液1%，20X）；
10^8 - 10^10 virus particles/hemisphere.

人类（Homo sapiens）大脑重量约1350克，体重约70000克，妊娠期约270天；小鼠（Mus musculus）大脑重量约0.45克，体重约18克，妊娠期约18.5天。

小鼠胚胎在E10.5时大约相当于人类胚胎第4周左右，此时神经管基本完成闭合。到E14.5时，小鼠胚胎脑开始产生皮层神经元，这对应人类胚胎约第8周的脑发育阶段。在E15.5至E18.5期间，小鼠皮层层次结构逐渐形成，神经元迁移和分化活跃，类似人类胚胎第10至20周左右。小鼠出生（P0）时，其脑发育水平相当于人类胎龄约24周的胎儿，脑结构仍不成熟。出生后7天（P7），小鼠脑进入突触形成高峰期，神经回路快速完善，类似人类新生儿阶段。到出生后14天（P14），突触修剪和髓鞘化加速，这与人类出生后1到3个月的脑发育相当。出生后21天（P21）左右，小鼠认知和运动能力迅速提升，对应人类婴儿3到6个月。随后在出生后30至60天（P30-P60），小鼠脑功能趋于成熟，继续经历突触修剪和髓鞘化，这大致对应人类出生后6个月到1岁。超过6个月龄的小鼠脑结构和功能逐渐接近成年水平，相当于人类2岁及以上儿童的大脑发育阶段。（by ChatGPT）

ANGAPP--RVLQKLVEEDRIGRAHGGHPGSPRGSLSRHPSSQ
ANGAPP**RVLQKLVEEDRIGRAHGGHPGSPRGSLSRHPSSQ

如果dupC：
（1）在小鼠中，移码并提前终止
ANGAPPRVLQKLVEEDRIGRAHGGHPGSPRGSLSRHPSSQ
ANGAPPPCAAETR*GRQNRKGTRWASRISSR*PKPSSQLP
（2）在人中，移码并提前终止
ANGAPPRVLQQLVEEDRMRRAHSGHPGSPRGSLSRHPSSQ
ANGAPPPSAAAAG*GGSNEKGTQWASRISPR*PEPPPQLP

（1）在启动子前加3个终止密码子，KO；
（2）在ATG与2号内含子中间用携带 c.649_650insC突变的人PRRT2 cDNA替换。cre后KO用的终止密码子切除，变成人源PRRT2（含突变位点）KI模型

cagcccctgagcctcactcaccaccctcaaaaaaatcccccccagccaatggggcccccccccCgagtgctgcagcagctggttgaggaggatcgaatgaga
ssODNminusC
cagcccctgagcctcactcaccaccctcaaaaaaatcccccccagccaatggggccccccccgagtgctgcagcagctggttgaggaggatcgaatgaga
sgRNA（#1）：GCTGCTGCAGCACTCGGGGG
PAM:GGG；Cas9 切割位置为在PAM前3个碱基处，即切割点位于 GCTGCTGCAGCACTC|GGGGG 之间